在不牺牲质量和预算的前提下，生产质粒DNA
本文节选自Cytovance Biologics应用笔记《Cytograde™ pDNA: Manufacture pDNA Without Sacrificing Quality Or Budget》，由于水平有限，详细内容，请参考原文。翻译本文仅为学术交流目的，无与Cytovance相关商业目的，如有侵权，请联系处理。
许多制药商对作为试剂或作为最终活性药物成分(API)使用的质粒DNA（pDNA）要求有明确的质量标准。从事基于病毒载体的基因治疗的公司使用pDNA作为其生产工作流程的一个组成部分。然而，由于pDNA也可以成为诸如DNA疫苗等治疗方法的最终API- 并随后与患者直接“接触” - 建立有效且具有良好成本效益的质量监督对于在不超支的情况下使风险最小化至关重要。
Cytovance是一家专注于大分子API快速开发和制造的CDMO公司，我们的许多客户与我们合作，创建一个“轻GMP”（GMP light）开发框架，在确保质量保证的同时，减少开销。虽然“轻GMP”并不存在，但Cytovance的团队开发了一项引人注目的新服务 - Cytograde™ pDNA，以帮助我们的客户在任何工艺和开发阶段生产高质量、负担得起的pDNA。Cytovance Biologics整合了世界一流的工艺和可放大的一次性或多次使用设备，以高效地生产优质质粒。
Cytograde™生产
Cytovance提供多种规模的一次性和多次使用发酵罐，以满足您的pDNA项目的需要。我们采取多个步骤，仔细管理温度转换控制，这是pDNA生产中的一个关键参数。我们的系统利用固定搅拌(~600rpm)、固定总气体流速(1 vv)、氧气补充以及指数流加，以在整个发酵过程中保持温度稳定。
我们的工艺和设备 - 结合对不同大小的质粒的特定生物量产量的精确跟踪 - 有助于确保不同大小质粒在不同规模条件下的质粒产量。
Cytograde™纯化
我们的集成设备包括预装层析整体柱，其可提供低剪切的纯化。
为了确保质粒的最佳纯化，我们使用了二乙氨乙基(DEAE)捕获步骤，将pDNA从宿主细胞蛋白(HCP)和RNA中分离出来。疏水作用层析(HIC)然后对pDNA进行精纯，其基于疏水性去除内毒素并分离超螺旋(sc)结构。
纯化可分为三个阶段：
初步回收 |
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捕获 |
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精纯 |
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我们的专用混合设备可有效折叠分子和gDNA，同时降低片段化。通过避免接触高剪切力，我们建立了均匀的混合强度和传播。我们的集成式一次性使用设备可实现：
高流速
高结合载量
流道内的低剪切
大质粒纯化(2 μm和6 μm孔)
sc质粒回收率高
降低缓冲液消耗
缩短纯化时间
良好的分辨率
CGMP级材料(如果需要)
Cytograde™质量
作为我们开发Cytograde™ pDNA的初步试点项目的一部分，我们评估了多个质粒，范围从5.4 kb到13.5 kb，使用5L、10 L和30 L发酵罐。
质粒的收获OD600约为29 - 107，湿细胞质量约为50- 270 g/L。滴度为0.9 - 3.8mg/g。低剪切混合和低剪切中空纤维切向流过滤(TFF)促进了高效的层析分离，提供了出色的终产品。一般产量为1 mg/g细胞浆液，通过腺相关病毒(AAV)检测验证，可保持生物活性。
CQA | 终产品 | 行业目标 |
DNA纯度（A260/A280） | 1.9 | ≥1.8 |
均质性%Sc | >85% | >80% |
内毒素 | <0.05 EU/mg | < 40 EU/mg |
宿主细胞蛋白 | < 1% | < 1% |
gDNA | ND | < 1% |
RNA | < 1% 凝胶上不可见 | < 1% 凝胶上不可见 |
通过Cytograde™pDNA，Cytovance完全有能力为客户提供一个创新、高效、经济的平台，以不同的规模，纯化制药级pDNA。
Cytograde™ 检测
在质粒生产后，Cytovance使用过程中控制 (IPC) 检测来分析pDNA产品，并确保关键规格符合要求。除了我们的Cytograde™pDNA，我们还提供研发和CGMP级检测，以评估一致性、纯度、工艺残留和安全性。通过我们的可放大技术，我们可以在每个质量等级中保持一致的规格。
使用Cytograde™ pDNA提高质量，管理成本
在今天竞争日益激烈的市场中，pDNA产品的成功商业化需要在开发的每个阶段都有战略和成本意识。幸运的是，Cytovance Biologics已经准备好并能够应对不同规模的pDNA生产，提供卓越的产品和卓越的价值。
原文：D.Schmidt, Cytograde™pDNA: Manufacture pDNA Without Sacrificing Quality Or Budget. Bioprocess Online.
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